渔药的给药方法和技术（3）,该文是方法方面有关硕士学位毕业论文范文与渔药和药方法和技术类自考毕业论文范文.
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抗菌药的稀释剂通常用纯水.一般可按商品药使用说明书上的配制.按1.0g药物需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制试验药液所加纯水的毫升数.如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为1g本品加5000mL纯水.此溶液即为用于做药敏试验的药液.
因为不同的致病菌对同种药物的敏感性可能是不相同的,采用药敏片法测定相同药物对不同种类的致病菌的抑菌效果时,可能会观察到直径不同大小的抑菌圈.如果致病菌不纯,该供试致病菌在试验中所产生的抑菌圈,与纯培养状态下菌株所产生的抑菌圈大小差异比较大,就会影响对药敏试验结果判断的准确性,最终导致水生动物执业兽医在疾病治疗中,难以参考药敏试验结果选择到合适的药物.
一般而言,应该避免直接挑取初分离的菌落完成药敏试验,除非在暴发性疾病流行的紧急情况下、当革兰染色提示出分离微生物为单一种类时,可以直接挑取分离菌落做药敏试验.但是,其结果也仅能作为药敏试验结果的初步报告,随后必须用标准方法重复完成药敏试验.
在涂有致病菌的平皿上,药敏片中的抗菌药物在琼脂内向四周扩散,其药物浓度呈梯度递减.因此,在药敏片周围一定距离内的致病菌生长受到抑制.在经过一定时间培养后,可形成一个抑菌圈（图1）.
以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管,管的两端要光滑,也可用玻璃管、瓷管）,放置在培养基上,轻轻加压,使其与培养基接触无空隙,并在小管处标记各种药物名称.每个平板可放4 ~6支小管.等待5分钟后,分别向各小管中滴加一定数量的各种药液,勿使其外溢.置适当温度条件下培养一定时间,观察结果.
抑菌圈越大,说明该菌对此药物越敏感,反之就敏感性越差,若无抑菌圈形成,就说明该菌对此供试药物具有耐药性.其抑菌圈直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系.因此,药敏试验的结果,应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准（表1）.
影响药敏片试验结果的主要因素有很多：首先,就是培养基.致病菌药敏试验所用的培养基种类较多,在一般情况下,可以参照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）统一要求的水解酪蛋白（Meller-Hinton,M-H）培养基,因为这种培养基中含有的低胸腺嘧啶是与磺胺类药物竞争的物质.因此,进行致病菌药敏试验的效果比较好.此外,这种培养基中还含有适量的Ca、Mg,在培养基中起到触媒的作用.但是,有些致病菌对培养基中的成分有特殊的要求,这类特殊的微生物就需要用特殊的培养基才能完成药敏试验.例如,对于弧菌中的专性嗜盐菌株、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种、发光杆菌美人鱼亚种和杀鲑弧菌的药敏试验培养基,最好是采用添加有1.5%NaCl的MHA培养基；柱状黄杆菌、嗜鳃黄杆菌的药敏试验培养基要用经过稀释的MHA培养基（或者采用Cytophaga agar,配方是0.05%（W/V）胰蛋白胨,0.05%酵母膏,0.05%醋酸钠,0.02%牛肉膏,1.0%琼脂,pH7.2~7.4）；而嗜冷黄杆菌的药敏试验培养基要用Cytophaga agar培养基（或者采用TYE agar,配方是0.14%胰蛋白胨,0.04%酵母膏,0.05% MgSO47H2O,0.05%CaCl2H2O,1. 0%琼脂,pH7. 2）、海豚链球菌的药敏试验培养基要用添加5.0%羊血的MHA.培养基中还有适量的Ca、Mg,在培养基中起到触酶的作用,其含量的变化,可影响氨基糖苷类和四环素对部分致病菌的药敏试验结果,这些物质的含量过高,抑菌圈会变小,含量过低,抑菌圈就会很大.致病菌药敏试验的培养基厚度大约为4mm,若培养基厚度大于4mm,会使细菌出现耐药；若厚度小于4mm,则可能导致本应耐药的容易出现敏感.所以,试验时最好不要把药敏片放在部位,而应均匀地排布在平皿周围的培养基上.制作药敏试验的培养基用水中的一些物质,主要是Ca、Mg、A1等矿物质离子,也会在很大程度上影响着药敏试验的结果.
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