当前位置:大学毕业论文> 本科论文>材料浏览

方法类函授毕业论文范文 和不同DNA提取方法对肺癌血浆循环DNA抽提效果比较类毕业论文提纲范文

主题:方法论文写作 时间:2023-12-17

不同DNA提取方法对肺癌血浆循环DNA抽提效果比较,该文是关于方法类函授毕业论文范文与抽提和肺癌和血浆方面毕业论文提纲范文.

方法论文参考文献:

方法论文参考文献 论文分析方法有哪些国家级期刊的查询方法论文调查方法论文方法有哪些

循环DNA是存在于人和动物体液中的胞外DNA分子.研究表明,健康人群循环DNA含量极低(约5μg/L左右).当机体在炎症、自身免疫病和肿瘤等情况下,其在体液中的含量会大大增加,机制至今仍不明确.因为循环DNA与包括肿瘤在内的一些疾病的产生与发展密切相关,所以其对于肿瘤等疾病的早期诊断和疗效评价具有重要的临床意义.本文分别采用不同的DNA提取方法对肺癌患者的血浆循环DNA进行抽提,其结果报告如下.

一、资料与方法1.一般资料:以2016年9月—2017年4月的68例肺癌患者为研究对象,其中男43例,女25例,平均年龄(58.2&plun;4.6)岁.

2.方法:所有肺癌患者取静脉血5ml置于EDTA抗凝管中,以3000r/min,离心10min吸取上清血浆于冻存管中,-80℃保存备用.分别参照试剂盒及文献报道方法用血清游离DNA提取试剂盒(北京金麦格生物技术有限公司)、SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒(SangonBiotech)、苯酚-氯仿法对肺癌血浆循环DNA进行提取.选取K-ras基因为目标基因,并设计扩增探针(Forward primer:5´-ATTAAAAGGTACTGGTGGAG-3´;Reverse primer:5´-CTATTGTTGGATCATATTCG-3´),对三种抽提方法所得循环DNA样本K-ras基因外显子2基因序列进行PCR扩增.扩增体系为:模板5 μL,扩增引物各2.5 μL,Taq PCRm mastermix 10μL.扩增条件为:95 ℃ 4 min;95 ℃ 40 S,43℃ 40 S,72℃ 40 S;40循环,72℃ 3 min.以血清游离DNA提取试剂盒(磁珠法)提取循环DNA模板扩增条带为参照,用BIO-RAD凝胶成像分析系统测定其他两种方法对应扩增条带相对亮度比值,用以比较三种方法对循环DNA的抽提效果.选取同一血浆样本,三种方法分别重复提取5次,进行PCR扩增,比较不同方法扩增条带亮度差异情况,计算各方法的变异系数(CV).

3.统计学方法:采用SPSS14.0进行,多个样本的比较采用x2检验.

二、结果1.提取效率的比较.三种提取方法中,磁珠法对应泳道扩增条带亮度最大,SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒方法次之,苯酚-氯仿法最弱(见图1).SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒方法和苯酚-氯仿法与磁珠法相比,其提取效率分别为67%%和49%(P<0.01).因此,三种方法中,磁珠法具有最高的提取效率,见表1.

2.三种方法抽提循环DNA重复性比较:通过比较各方法5次PCR扩增条带亮度差异值,磁珠方法的变异系数(CV)小于其他两种方法,说明磁珠法的重复性好,其他两种方法较差(P<0.01),见表1.三、讨论外周血循环DNA来自于肿瘤细胞的坏死和脱落,研究表明,肺癌肿瘤患者外周血循环DNA含量显著高于正常人,并且在基因遗传性上与肿瘤原发组织具有高度的一致性[1,2].提示循环DNA可为肺癌筛查、诊断及预后检测提供微创、方便的标本来源及检测对象.Szpechcinski等[3]分别对16例健康成人和30例未经治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者循环DNA进行定量研究,结果显示,健康人循环DNA含量为0.9—7.0ng/mL,而NSCLC患者的范围为1.5—50ng/mL,提示非小细胞肺癌患者循环DNA含量大大增加,表明其作为一种肿瘤标志物具有重要意义.也有报道指出循环DNA的定量对于肺癌的分期、化疗监测等有着重要的意义,可作为肿瘤临床治疗的一种依据[4].近年来,把基因突变与肺癌的临床治疗相结合,开展EGFR、Kras等肿瘤标记基因个体化用药检测的研究得到快速发展[5,6].王开云等[7]报道非小细胞肺癌患者血清循环DNA检测EGFR基因突变与肿瘤组织检测具有高度的一致性,对肺癌患者的诊断、筛查和治疗有着重要的意义.

由于血清中循环DNA含量极低,并且具有小片段的特征,因此,在提取时容易丢失,从而影响检测的灵敏度.可靠有效的循环DNA提取方法对研究结果影响很大.本文通过对几种提取方法的提取效果比较显示,磁珠法具有最高的提取效率和最低的CV值,认为磁珠法对乳腺癌患者血清循环DNA的提取效果最好,尤其适用于小片断DNA的提取.

本文总结:上文是一篇关于经典方法专业范文可作为抽提和肺癌和血浆方面的大学硕士与本科毕业论文方法论文开题报告范文和职称论文论文写作参考文献.

植物基因组DNA提取方法综述
丁丽艳1,何宝国2,刘 宇3,宋 斌1,李 伟1,周 莉2,朱巍巍4(1.黑龙江省畜牧研究所,黑龙江齐齐哈尔161005;2.齐齐哈尔医学院,黑龙江齐齐哈尔161042;3.黑龙江省兽医科学研.

槟榔香六堡茶中香气成分提取方法的比较
六堡茶,中国历史上著名的黑茶之一,是广西壮族自治区梧州市特色优势产业和知名农业品牌,也是广西重点发展产业之一,因产于苍梧县六堡镇而得名 “槟榔香”一直被认为是六堡茶的特有香气,.

不同提取方法对新疆薄皮核桃油酸价和过氧化值的影响
林泽庆(佛山市质量计量监督检测中心,广东 佛山 528000)摘 要核桃是一种具有很高营养价值和经济价值的胡桃科果木 从核桃仁中提炼的核桃油中含有丰富的微量元素、多酚化合物、黄酮类物质以及多种维生素 .

维药榅桲渣中可溶性膳食纤维提取方法与工艺
新疆维吾尔族人称榅桲为“比也”,榅桲除可用于生食外,还可用作抓饭的辅助品、熬制果酱…… 榅桲的主要医疗功能有止咳、降血压、降脂、治疗胃肠病、头晕心慌、防止肝病……,具有浓郁地方.

论文大全