结核病实验室诊断技术进展,本文是实验室相关硕士论文范文与结核病和实验室和诊断方面毕业论文怎么写.
实验室论文参考文献：
张迎春 代晓凤
（甘肃瓜州县人民医院检验科 甘肃 瓜州 736100）
【摘 要】结核病是临床上发病率和死亡率均较高的全球性传染性疾病.而结核病迅速准确的诊断是防控结核病传染的关键环节,同时也是临床有效治疗的基础.本文通过综述方式,探讨当前临床结核病实验室诊断技术研究进展情况.
【关键词】结核病；实验室诊断；检测技术
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】B 【文章编号】1004-597X（2016）04-0221-01
结核病防控是一个全球性的公共卫生问题,发病率及死亡率较高.由于结核病具有多样化临床表现,可累及身体各个系统,特别是肺外结核病极为隐匿,大大增加了临床诊断难度.而实验室诊断在结核病的防治工作中发挥着不可替代的作用.近年来,随着现代医疗技术的发展,结核病实验室诊断技术发展迅速,为临床诊断提供了诸多新方法.
1. 结核病细菌检测技术
1.1 痰液涂片
进行痰液涂片抗酸染色检测是最基本,也是最常用的细菌学检查法.具有操作简单、经济、迅速等特点,不足在于敏感性不强,难以区别死菌和活菌,同时受检验人员的专业水平及痰液标本质量的影响较大.近年来,LED 荧光显微镜图片检测技术得到较广泛的应用,这是把二级发光管（LED）和荧光显微相结合得到的一种新型痰液涂片检测技术,具有良好优势,包括不需定期维护、寿命较长、可调节光强度、不易导致视觉疲劳、对身体无害等.同时,对使用环境要求不高,一般在光线相对较弱环境下就可读片.该技术操作简单、经济,且具有较高的特异性及敏感性,读片时间和视野要优于萋尼抗酸染色法.
1.2 MGIT960 系统
分枝杆菌生长指示管（MGIT）960 系统是新一代分支杆菌培养和药敏检测技术,不但解决了以往Bacte60 放射性问题,同时还保留了速度优势,进一步发展了结核病细菌学检查.其原理就是在培养瓶里,分支杆菌生长会消耗掉氧,荧光显示剂就会被激活,进而发出荧光.该系统每1h 连续性测定培养管中的荧光强度,对分支杆菌的生长状况进行判断.该培养系统主要应用在胸水、痰液、脓液、关节液等临床标本分枝杆菌的培养和药敏试验.国外临床实践表明,该系统的阳性率、阳性时间等和460系统基本一致.但是960 系统自动化水平较高,操作更为简单.当前,一些综合医院中应用的MGIT320在结核病防控中发挥着积极效用.
2. 免疫检测技术
2.1 结合菌素皮肤试验（TST）
结核菌素皮肤试验是一种以IV 型变态反应为基础的皮肤试验,只有感染过结核杆菌就必然会产生一定的致敏淋巴细胞,对细胞杆菌具有较强的识别力,当再一次遇到经皮注的少量结核菌素时候,致敏T 淋巴细胞受到相同抗原再一次作用一般在2 到3d内出现局部炎性反应,也就是阳性反应.该检测法在结核免疫诊断中应用较广,其对活动性结核病诊断具有较高的灵敏度,达到77%.但通常患者出现这些情况时,它的灵敏度会大幅降低,比如：儿童结核、免疫缺陷患者、老年结核等,往往会出现假阴性的结果.此外,有接种卡介苗的同样会出现阳性反应,当前该疫苗在我国有广泛影响,在很大程度上影响到TST 的应用效果.
2.2 γ 干扰素释放试验（IGRA）
这是结核诊断中影响力最大的一个实验室检查技术,该检测法的原理就是,在感染结核菌之后体内会长时间存在抗原特异性记忆性T 细胞,在再一次遇到抗原作用时,就会激活而释放出γ 干扰素.当前,该项技术有两类商业检测法,一是QFT-G 检测法,就是应用ELISA 法进行γ 干扰素水平检测,以IU/mL 来表示最终结果.二是T-SPOT.TB 检测法,采取酶联免疫斑点法来进行γ 干扰素的T 细胞数进行检测.两者相比,后者更为灵敏,但在特异性上要弱于前者.但这两种检测法均要优于TST,且被应用到潜伏结核诊断中.该项检测技术相对复杂,在实验设备、材料等方面具有较高要求,当前我国尚未得到普及.
现阶段,IGRA 检测抗原主要是早期分泌抗原靶6 和培养滤液蛋白10.根据该检测法的原理,临床研究者开始探寻其它结合特异性抗原及细胞因子,比如结核抗原Rv3879c、干扰素诱导蛋白IP-10 等.此外,病灶IGRA 检测是一种新型应用,活动性结核记忆T 细胞通常在外周血液中含量较低,所以外周血液检测一般无法区分活动性和潜伏性的结核,但是活动性结核抗原特异性T 细胞能够在病灶处聚集,且会增值.有报道称,应用酶联免疫斑点法进行肺灌洗液效应T 细胞进行检测,涂片阴性灵敏度及特异性分别在90% 和80%.
3. 分子生物学检测技术
3.1 核酸检测技术
聚合酶链反应（PCR）、DNA 指纹技术等具有较高的检测敏感性和特异性,且操作上较为简单、快速,整体灵敏度要优于传统检测法,能够真实反映出结核病的实际情况,对临床治疗及疗效评价具有重要的指导性意义.但是由于需要专门仪器及技术作为基础,在临床推广上受到很大限制.
3.2 蛋白芯片技术
该项检测技术具有高灵敏度和特异性,同时是一种微型化蛋白质分析技术,是一种新型技术.其工作原理就是基于微孔滤膜为载体,把纯化结核菌脂阿拉伯甘、蛋白相对分子量等抗原通过微阵列技术固相在相同的膜片上,在通过微孔滤膜渗滤、浓缩等作用,在固相膜上迅速实施抗原- 抗体反应,然后在膜上应用免疫金作为标记物予以显色.显色之后把芯片置入读片设备,通过专门软件对不同抗原点阵列的灰度值予以分析,全过程约30min.该法在结核病诊断中的特异性达到96.2%,灵敏度达到72.0%.同时金标记物较为稳定,可在室温内冻干保存.
总之,当前结核病的实验室诊断技术种类较多,在工作原理上有较大差异,各有所长.在实际应用中应根据实际需要选择最佳的实验室检测法,遵循菌体水平到分子水平,传统到现代的原则进行全面检测和研究,以提高结核病诊断的准确性,为临床防治奠定基础.
参考文献
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