三种生物活性陶瓷材料对iPS细胞增殖的影响,本文是生物论文如何写跟陶瓷材料和生物活性和增殖相关硕士毕业论文范文.
生物论文参考文献：
中图分类号：G712
文献标识码：A
DOI：1 0.1 6871 /j.cnki. kjwhc.201 8.03.030
摘 要 目的：比较三种生物活性陶瓷p一磷酸三钙p -TCP、镁橄榄石Mg2S104、斜顽灰石MgS103对iPS细胞增殖的影响,寻找适宜iPS细胞生长和增殖的生物陶瓷材料浸提液的浓度,从而选择合适的生物陶瓷材料将其应用于骨组织工程骨缺损的修复,进而应用于临床骨缺损的修复.结果：3种生物陶瓷材料都具有良好的生物相容性；3种生物陶瓷材料浸提液在一定浓度范围内（1/32~ 1/2倍过饱和生物陶瓷材料浸提液浓度）能促进iPS细胞的增殖；在一定浓度范围内（1/16~ 1/2倍过饱和生物陶瓷材料浸提液浓度）对iPS细胞增殖的促进作用MS>M2S>p -TCP,而在一定浓度范围内（1/64~ 1/32倍过饱和生物陶瓷材料浸提液浓度）对iPS细胞增殖的促进作用M2S>MS>p -TCP；最佳促进细胞增殖的浓度分别是1/32倍过饱和生物陶瓷材料浸提液浓度(M2S)和1/16倍过饱和生物陶瓷材料浸提液的浓度(MS.B -TCP).
关键词 生物活性陶瓷 iPS细胞增殖
The Impact of Three Bioactive Ceramic Materials on theProliferation of iPS Cells,／Wu LinAbstract Objective: To compare the impacts of three kinds ofbioactive ceramic materials,B-tricalcium phosphate(B-TCP),magnesium olivine (Mg2S104) and oblique enstatite (MgS103), onthe proliferation of iPS cells, and find the appropriate iPS cellproliferation biological extract concentration, in order to choose asuitable biological ceramic material and its application in bonetissue engineering repair of bone defect. Methods: In vitro ampli-fication of iPS cells, three kinds of biological ceramic materialextracts (each ceramic material extract has seven different con-centrations), were added in iPS medium, using MTT method toobserve different kinds, different concentrations of biological ce-ramic leaching liquid on iPS cell proliferation.Key words biological ceramic materials;iPS cells;proliferation
1前言
人体组织的损伤修复和重建是现代医学试图解决的重大问题.现代医学最终追求的目标是：如何将损伤或缺损尽量恢复到损伤前的状态,达到从外观到功能,直至内在组成结构都趋向于完美的修复.组织工程技术首先在体外大量扩增种子细胞,然后把体外大量扩增得到的种子细胞种植在生物材料上,在体外和体内的培养过程中,随着生物材料的不断降解、细胞分泌出大量的细胞外基质,最终形成了由活细胞构成的各种组织、器官.生物材料在组织工程中具有至关重要的作用,其发展直接影响组织工程的研究和临床应用.
材料的化学性能是促使各种细胞增殖和成骨分化的一个主要因素.先前的研究表明,可降解生物陶瓷可以调节各种细胞的生长和代谢,通过释放离子Si、Ca、P、Na到培养液或体液中,这些成分可以启动相关基因的表达使细胞外基质的形成和矿化.研究细胞增殖和成骨分化有助于我们了解生物陶瓷材料的特点,从而研究合适的支架材料应用于组织缺损的修复.
iPS细胞是公认的成体干细胞,合适的条件下,可以分化为多种细胞类型,包括成骨细胞,软骨细胞和脂肪细胞,在骨组织工程中得到广泛应用.在本研究中,iPS细胞用于体外培养扩增；在iPS细胞培养液中添加不同种类、不同浓度的生物陶瓷材料浸提液,观察不同种类、不同浓度的生物陶瓷侵提液对iPS细胞增殖的影响.
2材料与方法
2 1主要细胞的培养
2 1 1小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离和培养
取一只妊娠14 --16天的昆明孕鼠；断颈处死后,浸泡于浓度为70%的酒精中5min,进行表面消毒；腹部备皮,剥除腹部皮毛,暴露腹肌,无菌剪刀打开腹腔,取出有胚胎的子宫,加入lOmlPBS溶液；把子宫剪开后,将胚胎放置于培养皿中,去除胎盘、胎膜,然后添加PBS溶液反复清洗3次；去掉胎鼠的头尾四肢,剩余的躯干组织再用PBS溶液清洗3次；吸去PBS溶液,根据胚胎的数量,添加2～3滴0.25%胰酶+0. 04%EDTA.然后把胚胎组织剪碎成乳糜状,继续添加3ml的胰酶溶液进行消化；添加含10%胎牛血清的MEF培养液8ml终止消化；将细胞收集到离心管中,在离心机上,lOOOrpm／5min离心,使消化的细胞沉淀；将沉淀的细胞制成细胞悬液,准备6个干净的lOOmm贴壁培养皿,每个皿中加入9ml的MEF培养液,按照每皿中加入Iml的细胞悬液,充分混匀,然后放在5%COD、37℃恒温培养箱中进行细胞培养；24h后,依据细胞生长状态及培养液颜色,适时换液.
2 1 2 iPS细胞饲养层细胞的制备
从液氮罐中取出MEF细胞进行复苏；将生长状态良好的MEF细胞中加入3ml丝裂霉索,在5% C02、37℃恒温培养箱中处理细胞3h,然后完全去除丝裂霉素,减少丝裂霉素对细胞的损伤；加入胰酶消化液,制备单细胞悬液；细胞计数,重新接种于培养皿中,每个60mm的培养皿中按照接种数量为1×106个MEF细胞,加入3ml的MEF培养液,放置于5%C0.、37℃的恒温培养箱中进行细胞培养.2 1 3 iPS细胞的培育与增殖
一般实验室里都有充满氮气的罐子,从这些充满氮气的罐子中取出之前冻存在里面的iPS细胞,将冻存的iPS细胞放在温度大约为37摄氏度的容器中,进行快速溶解冻存管中的细胞,复苏时间为2min；把复苏的细胞转移到离心管中,加入培养液,lOOOrpm／5min离心,然后弃掉上清液；重新加入细胞培养液,接种到含有滋养层细胞的60mm培养皿中；每天依据细胞生长状态、培养液颜色,适时换液；3天后,iPS细胞大量增殖,加入2ml0. 25%胰酶+0. 04%EDTA消化制备成单个细胞悬液.计数细胞,以30--40万个的数量接种到预先制备好的滋养层细胞上,放置5%C0.、37℃恒温培养箱中培养,每天更换2次iPS细胞培养液.
2 2生物侵提液的制备
将生物陶瓷材料的无菌粉剂按200mg／mL的比例浸泡于iPS细胞培养液中,37℃静置24h,制成过饱和生物陶瓷材料浸提液,用0. 22 u m微孑L滤膜过滤；依次稀释为过饱和生物陶瓷材料浸提液浓度的1、1／2、1／4、1／8、1／16、1／32、1／64备用.
2 3细胞增殖测试
用MTT的方法来检测细胞在生物浸提液中的增殖：选择生长旺盛的iPS细胞,用含15% FBS的H-DMEM培养液配制成1.5×104个细胞／mL的细胞悬液,向96 7L培养板中每孑L加入200 ul培养液,置于C0：含量为5%、温度维持在37摄氏度的保持恒定温度的培养箱中进行培养,保证细胞沿着器皿单层贴附在壁内生长；经过1天后,将细胞培养原液倒掉,本次实验组中加入材料浸提液,阴性对照为含15%FBS的新鲜H-DMEM培养液,继续在培养箱中标准条件下分别培养1、2、3、4天；向96 7L板中的每孑L加入20 ul MTT溶液,然后在5%C0n、37℃恒温培养箱中培养4h;结束细胞培养后小心的吸去孑L内的残存培养液；每孑L加入150 ul二亚砜,将其放置在摇床上低速振荡,用酶标仪(sunrise,USA)在492nm波长下测定其光密度(Optical density,OD).根据吸光度值计算细胞相对生长率(Relative Growth Rate; RGR):RGR等于实验组OD值／阴性对照组OD值×100%,实验中每组设六个样本,根据相关文献提出的标准,当RGR>75%时可认为该材料细胞相容性良好.3结果（iPS细胞培养）
在有饲养层和LiF存在的情况下,iPS细胞呈集落生长,增殖迅速,平均2 3天可传一代.状态良好的iPS细胞集落呈圆形,集落突起饱满,边缘光滑,有较好的折光率.
4结论
当浸提液浓度为过饱和生物陶瓷浸提液浓度时,3种材料的细胞相对生长率均大于100%,表明3种材料都具有良好的生物相容性；在1／16 --1倍的过饱和生物陶瓷浸提液浓度时,三种生物陶瓷材料浸提液对iPS的增殖的促进作用MS>M2S>D -TCP,而在1／64-1／32倍的过饱和生物陶瓷浸提液浓度时对iPS增殖的促进作用M2S>MS>D -TCP;最佳促进细胞增殖的生物陶瓷浸提液浓度分别是1／32倍过饱和生物陶瓷浸提液的浓度(M2S)和1／16倍过饱和生物陶瓷浸提液的浓度(MS、D-TCP)；生物陶瓷材料浸提液浓度变化对细胞增殖影响的顺序为M2S>MS>D -TCP;浸提液中细胞的RGR随培养时间延长存在明显差异,随着时间的延长相对生长率逐渐下降,尤其以M2S为甚.
参考文献
[1] Wernig M,Zhao J P,Pruszak J,et al.Neurons derivedfrom reprogrammed fibroblasts functionally integrateinto the fetal brain and improve symptoms of rats with Parkinson´s disease. Proc NatlAcad Sci USA,2008,105(15):5856-5861.
[2] Takahashi K,Tanabe K,Ohnuki M,et al. Induction ofpluripotent stem cells from adult human fibroblastsby defined factors. Cell, 2007, 131 (5):861-872.
[3] Narazaki G,Uosaki H,Teranishi M,et al. Directed andsystematic differentiation of cardiovascular cellrom mouse induced pluripotent stem cells.Circulation, 2008, 118 (5):498-506.
编辑李金枝
此文结束语，上述文章是一篇关于经典生物专业范文可作为陶瓷材料和生物活性和增殖方面的大学硕士与本科毕业论文生物论文开题报告范文和职称论文论文写作参考文献.
随水滴施3种生物菌肥对棉花黄萎病的防治效果
摘要选取近年来黄萎病害发病较重的滴灌棉田,开展随水滴施枯草芽孢杆菌肥、“施倍健”哈茨木霉菌剂和“99”植保素对棉花黄萎病的防效试验 每种药剂分别设置3个.
深挖含硅陶瓷材料在家电上的应用潜力
近年来,在消费者对家电的功能、外观、防护……要求越来越高的推动下,越来越多具有“特异功能”的新材料进入家电应用领域 2017年11月2日,在2017年中国家用电器技术大会上,中.
白藜芦醇的生物活性与在食品保健中的作用
摘 要本文首先对白藜芦醇的代谢以及其生物活性进行介绍,然后就其在食品保健中的作用进行探讨分析 关键词白藜芦醇；生物活性；食品保健中图分类号TS201 4白藜芦醇又叫芪三酚,是一种多酚类化合物,广泛存在.
水果中天然微生物酵素发酵机理、代谢过程与生物活性
微生物酶是指一种或多种新鲜蔬菜、水果、蘑菇、草药……丰富的维生素和酶的发酵 微生物在发酵的过程中,可以有效的吸收矿物质里面的营养元素控制没 微生物酶里面包含了大量的营养元素,而且还含有大量的活性成分 .