基于高效液相色谱的景迈山晒青毛茶指纹图谱的初步,本文是关于指纹相关专升本毕业论文范文与高效液相色谱和毛茶和景迈有关论文如何写.
指纹论文参考文献：
摘 要：本文主要采取试验分析的方式,将景迈古茶山晒青毛茶中的没食子酸（GA）、表没食子儿茶素（EGC）、、儿茶素、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、茶叶碱作为主要对象,构建了景迈古茶山晒青毛茶的标准图谱.
关键词：景迈山；青毛茶；高效液相色谱
Abstract：In this paper, we adopt the method of test analysis, places of gallic acid (GA), table galliccatechins, caffeine and catechins (EGC), epicatechin (EC), table gallic acid ester gallic catechins (EGCG),gallnut catechins gallic acid ester (GCG), epicatechin gallic acid ester (ECG), tea alkaloids in dried green teaas the main object, build a standard map of dried green tea in Jingmai Tea mountain.
Key words：Jingmai mountain; Crude tea; High performance liquid chromatography
中图分类号：S571.1
景迈山位于云南省普洱市澜沧县,地处高原山区,地貌类型多样,气候类型复杂,气温垂直落差异常显著,其自然条件非常适宜茶树的生产,且大部分茶园为古树茶园.不同地区所产的晒青毛茶在品质上差异较大,而晒青毛茶是普洱茶的主要原料,它的好坏决定了普洱茶品质的优劣.
目前,茶叶品质主要从外形和内质两方面进行感官评价,其中内质评价指标,包括香气、汤色、滋味和叶底四方面.同时,也通过茶氨酸、和儿茶素类等几个主要成分的含量来判断茶叶的品质.但是,仅通过简单的感官审评以及几个成分来判定茶叶品质,尤其是原产地和非原产地茶叶,说服力不足,无法真正判定原产的茶叶与非原产的茶叶的区别,也就无法消除非原产地茶叶对原产地茶叶的侵害.为此,借鉴目前广泛应用于中药品质评定和质量控制的指纹图谱技术,建立一套综合的补充评鉴系统,以判定茶叶品质,区别茶叶产地[1].
1 材料与方法
1.1 实验材料与试剂
1.1.1 实验材料
本实验所采用的茶样均由实验者购于景迈茶区,为2012 年晒青毛茶（春茶）,共10 个批次,编号为S1-S10.
1.1.2 试剂
没食子酸（GA）、表没食子儿茶素（EGC）、、儿茶素（C）、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、茶叶碱（美国sigma公司）；茶氨酸（纯度99.7%）、没食子酸（GA）标准品（国药集团化学试剂有限公司）；乙睛、甲醇、三氟乙酸（美国J.T.Bake 试剂公司）,HPLC 级.
1.2 设备
日本SHIMADZU LC-20AD 液相色谱仪,DGU-20A5 脱气系统,SPD-M20A 二级管阵列检测器,LCsolution 液相色谱工作站；Diret-Q5 型超纯水机,法国Milipore 公司；AS3120A 型超声清洗仪,天津奥特赛恩斯仪器有限公司；PV-1 型小型旋涡混匀器,德国IKA 公司；M27942B 型移液,德国eppendorf 公司；HH-6 型数显恒温水浴锅,江苏省金华市荣华仪器制造有限公司.
1.3 供试样品溶液的制备
准确称取茶叶样品1.0 g,加入100 mL 60% 甲醇,80 ℃水浴超声提取20 min,滤纸过滤,定容至100 mL,0.22 μm 滤膜过滤后备用.以表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、儿茶素（+）C、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）5 种儿茶素及为标样,根据标准品的保留时间进行定性,每个样品重复5 次进样[2].
色谱条件如下：色谱柱,Aglient poroshell 120 EC-C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）,柱温25 ℃；流动相,A 相为0.05% 三氟乙酸,B 相为纯乙腈；梯度洗脱,60 min 内完成,洗脱梯度见表1；流速,1 mL/min；进样量,5 μL；检测波长280 nm.
2 方法学考察
2.1 标准品试验
取一定量的混标溶液,按1.3.1 的色谱条件进样分析,得到色谱图1,由图1 可知,各组的分离度良好.
2.2 方法学考察
2.2.1 线性试验
分别精密吸取不同浓度的对照品溶液依次按1.3.1色谱条件进样,测定各色谱峰的峰面积,以进样浓度（μg/mL）为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线[3],得9 种组分的回归方程和相关系数,见表2.实验结果表明,儿茶素、没食子酸在所测浓度范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系.
2.2.2 精密度
在相同的色谱条件下,同一标准样品连续进样测定6 次,检测得出标准品溶液的分离图谱和各色谱峰的峰面积[4].测定结果表明,所有标准品的相对保留时间的RSD（%）都小于0.5,相对峰面积的RSD（%）都小于4.0,表3 结果表明所建立的高效液相色谱色谱法用于茶叶的分析具有良好的精密度,符合检测方法对精密度的要求.
2.2.3 重复性
取同一标样,分别在0、2、8、12、24、36 h 按1.3.1 色谱条件进样,每个时段连续进样测定6 次,得出各色谱峰的峰面积[5].分析结果表明,所有标准品的保留时间的RSD（%）小于1.1,相对等面积的RSD（%）小于3.0,符合检测方法对稳定性的要求,见表3.
3 结果分析
分别将10 批样品的指纹图谱输入国家药典委员会开发的《中药指纹图谱相似度评价系统研究版（2004A）》中,设置第1 批样品为参照图谱,对照图谱生成方法采用中位数法,时间窗宽为0.10,多点校正后自动匹配,生成对照指纹图谱.最后确定和儿茶素的出峰时间,得到10 批次样品的色谱叠加图和对照指纹图谱.
匹配数据见表4.用和儿茶素作对照,并将样品HPLC 图谱与混合对照品的色谱图反复对比,对指纹图谱中部分共有指纹峰进行确认.
3.1 10 个样品指纹图谱的相似度
由表5 可知,10 个茶样的高效液相色谱图相似度极高,选择样品S6 为参照,差异性最大的S2 也有95.8%的相似度,差异性不显著.以标准图谱R 为对照,差异性最大的S2 也达到92.6% 的相似度,本试验中的10 个样品的相似度非常高[6].
3.2 10 个茶样的标准图谱与其他茶样图谱的差异
将6 个不同地方的2012 年晒青毛茶（春茶）和1个景迈古茶山的2012 年晒青毛茶（春茶）按上述方法处理后进样[7],得到的图谱与标准图谱R 进行比较分析,6 个测试样品的的图谱与标准图谱R 相似度范围为76.2% ～ 84.3%,1 个景迈山茶样的图谱与R 的相似度达到94.6%,详见表6.
4 结语
本分析方法一次性分离景迈古茶山晒青毛茶中的没食子酸（GA）、表没食子儿茶素（EGC）、、儿茶素（C）、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、茶叶碱9 种成分,以这9 种成分作为分析的主要对象,构建了景迈古茶山晒青毛茶的标准图谱R,以R 为参照,对其他产区的晒青毛茶进行比较分析,差异较明显.利用构建的标准图谱R能够很好地甄别景迈古茶山晒青毛茶的真伪,也为后续普洱茶指纹图谱的研究奠定了基础.
参考文献：
[1] 宁井铭,张正竹,谷勋刚,等. 基于高效液相色谱的普洱晒青毛茶指纹图谱识别方法[J]. 农业工程学报,2010,3（3）：243-248.
[2] 王丽鸳,成 浩,周 健,等. 绿茶数字化多元化学指纹图谱建立初探[J]. 茶叶科学,2007,27（4）：335-342.
[3] 成 浩,王丽鸳,周 健,等. 基于化学指纹图谱的绿茶原料品种判别分析[J]. 中国农业科学,2008,41（8）：2413-2418.
[4] 周 健,成 浩,曾建明,等. 基于近红外的多相偏最小二乘模型组合分析实现茶叶原料品种鉴定和溯源的研究[J]. 光谱学与光谱分析,2010,30（10）：2650-2653.
[5] 王丽鸳,成 浩,周 健,等. 普洱茶的HPLC 化学指纹图谱分类研究[J]. 浙江林业科技,2009,29（1）：25-30.
[6] 石志红,何建涛,常文保. 中药指纹图谱技术[J]. 大学化学,2004,19（1）：33-39.
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