乳酸菌国家检验标准的更新,本文是乳酸菌毕业论文格式范文跟乳酸菌和检验和标准有关在职研究生论文范文.
乳酸菌论文参考文献：
摘 要：GB4789.35-2016 版乳酸菌检验的国家标准于2017 年更新实施,将原来的GB4789.35-2010 版替代为GB4789.35-2016 版.其中更改了大部分内容,特别是乳酸菌计数的改变尤为巨大.结合检测的样品实验数据,比较分析这次国家标准更新表现在检测中现象观察和结果数据的不同,谈谈个人对最新的国家标准检测乳酸菌实验过程的一些看法.同时,针对国家标准中选做部分——乳酸菌鉴定,提出个人意见.
关键词：乳酸菌鉴定；乳酸菌计数；国家标准
Abstract：The test of lactic acid bacteria national standards updated in 2017, the original GB4789.35-2010 version he been replaced by GB4789.35-2016 edition. A lot of content has been changed, especiallythe change of lactic acid bacteria counting. After compared analysis of the original national standard with thenew edition, combine with the test samples experimental results data in the detection of different performance,I would like to talk about my personal opinion on the latest national standards on testing the experimentalprocess about lactic acid bacteria. At the same time, I would like to give out some thought on the last part ofnational standard: identification of lactic acid bacteria.
Key words：Lactic acid bacteria identification test; Lactic acid bacteria counting; National standards
中图分类号：TS252
乳酸菌是一群能发酵碳水化合物产生乳酸的革兰氏阳性细菌的通称.目前,已发现的乳酸菌可以划分为43 个属,包括373 个种及亚种,其中绝大多数是厌氧菌或兼性厌氧菌.乳酸菌能寄生在人类、动物和植物中,其在发酵过程中的关键代谢产物是乳酸,当与其他代谢产物一块作用于人体时,可对人体健康起到有益的作用,所以在各类食品中,如酸奶、干酪、肉类、巧克力和各类保健药品中乳酸菌得到了广泛的应用[1].在食品国家安全检测中GB4789.35-2010 一直是乳酸菌检测的标准,最近更新为GB4789.35-2016 版本,可见乳酸菌在人们日常食品生产、消费中起到重要作用.
1 乳酸菌国家标准检验的更新
根据乳酸菌检测国家标准,选用一个酸奶样品进行新旧标准整个实验流程的对比试验,使用的旧版为GB4789.35-2010,使用的新版为GB4789.35-2016.对 所得试验结果和实验过程中的现象进行对比,分析新旧版标准的不同与改版的目的.
1.1 培养基的配制及对比
培养基的配制部分,改变并不大,主要使用了MC 培养基、MRS 培养基以及改良MRS 培养基,其中新版的改良MRS 培养基里多添加了半胱氨酸[2].半胱氨酸是一种生物体内常见的氨基酸,也是一种还原剂.考虑到双歧杆菌严格厌氧的特性,半胱氨酸不但可以作为营养成分以供菌株培养,同时作为一种保护剂保护菌株防止其因氧气影响生长.
1.2 实验主要操作流程及对比
第一步依然是将样品用生理盐水稀释,然后接种到3 种不同的培养基中,培养过后根据公式计数,最后选做鉴定.第一步稀释并没有改动,而在接种部分,2010 版使用的是涂布0.1 mL 的做法[3],而2016 版则使用1 mL 倾注的方法[3].在培养时间上,2010 版的为（48&plun;2）h,而2016 版的则延长至（72&plun;2）h[2-3].就涂布与倾注而言,倾注法更为省事,但要求培养基的温度不能太高,需要控制在（46&plun;1）℃,倾注法能将培养基包裹,使样品更好地隔绝空气,让改良MRS中的莫匹罗星锂盐更好地起到抑制乳杆菌的作用,加上半胱氨酸的保护作用,有助于双歧杆菌的生长,且避免了涂布时出现的重叠不均匀等现象,可操作性更高.在取样量上,1 mL 比0.1 mL 更有代表性,不确定度更低.至于因培养时间改变引起的区别主要在于对平板菌落计数的时候,如果平板菌落较多,培养时间延长至72 h,最终可能难以计数,而对于平板上菌落数量较少的情况并没有太大影响.而在计数方面改动较大,将原来的公式从相减变为相加；同,2016 版将根据样品含菌的不同分别计数,整体弥补了前几个版本在计数上的补足.而最后鉴定部分并没有太大的改动.
1.3 计数实验结果读取及对比
以某品牌酸奶为例,分别按照国标2010 版与2016版进行实验,实验部分结果,分别见表1、2.
用T-test 进行数据分析,10-5 稀释度的P 值为0.000 048 ＜ 0.01,为极显著差异.10-6 稀释度的P 值为0.28 ＞ 0.05,无显著差异.
通过对平板上菌落数数据分析以及实验操作过程的分析,可以得到以下结果：在相同稀释度下,稀释倍数越低,平板菌落数越多,倾注法的菌落数量显著比涂布法多.分析其原因,主要在于2 点：①倾注法平板同一点上由于立体的效果可出现多个菌落计数,同时在混合均匀的前提下不容易出现多个单菌落相连.②涂布法存在的堆叠、涂布棒损耗以及操作等因素,使得菌落数偏小.在相同稀释度下,稀释倍数越高,平板菌落数越少,倾注法的菌落数量与涂布法菌落数量相当,无显著差异.因此,在样品得到充分稀释的前提下,在计数结果上,新标方法能较准确地得出结果.
1.4 乳酸菌鉴定及对比
对于选做鉴定部分,新标与旧标相似,都是在计数结束后在原有的平板上挑取3 个以上单菌落进行鉴定.使用旧标的方法,由于是涂布于培养基表面,挑取单菌落十分方便可行,而使用新标的方法就相对比较麻烦了.由于是倾注到培养基里面,虽有部分菌落可长在平板表面,但要挑取多个菌落时往往需要挑开原有的培养基.同时,如果同一平板菌落数较多且分布比较密集,要挑取到单菌落就比较困难.在挑取单菌落后,同样进行革兰氏染色、生化鉴定等试验.新旧标准同样面临相同的问题,对于比较复杂的样品（含有多种乳杆菌）,很难全部一次鉴定出来,如只按照标准所述的生化鉴定方法,则干酪乳杆菌干酪亚种与鼠李糖乳杆菌难以区分.
2 对乳酸菌检验的一些想法
对于2016 新版乳酸菌检验的改变,笔者认为更为贴近客观事实.但在最后鉴定部分依然还有商榷的地方,例如：为了更有效地进行鉴定,是否应该像GB4789.35-2016 版双歧杆菌鉴定一样将计数与鉴定分离开来,如计数使用倾注法而鉴定使用涂布法.同时,对于产品的鉴定规定,只对使用单一菌种的产品进行鉴定[4],而在生化鉴定方面,不只是规定使用表中生化试剂,而可以使用像API50CH 这类商品化的生化试剂盒又或者微生物生化鉴定系统.除了生化鉴定,笔者认为还应添加分子生物学的方法进行鉴定,特别在鉴定细菌分类到种、亚种的时候,往往些许的变异就可以改变生化现象[5].因此,引入像PCR、荧光PCR 等分子方法十分重要,如16S rRNA 基因间隔区（IntergenicSpacer Region,ISR）的序列分析技术[6]、限制性片段长度多态性分析技术（Re － striction FragmentLengthPolymorphi,RFLP）、扩增片段长度多态性分析技术（Amplified Fragment Length Polymorphi,AFLP）、DNA 芯片技术、肠细菌基因间重复共有序列分析技术（Enterobacte － rial Repetitive IntergenicConsensus Sequences,ERIC）以及重复基因外回文序列分析技术（Repetitive Extragenic Palindromic Sequences,REP）等,这些方法在乳酸菌分类检测方面都是有效可行的方法[1].
参考文献：
[1] 张家超,孙志宏,刘文俊,等. 适用于乳酸菌分类鉴定的分子生物学技术[J]. 乳业科学与技术,2009（2）：89-93.
[2] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.GB4789.35-2010 食品安全国家标准食品微生物学检验 乳酸菌检验[S]. 北京：中国标准出版社,2010.
[3] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.GB4789.35-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验 乳酸菌检验[S]. 北京：中国标准出版社,2016.
[4] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.GB4789.34-2016 食品安全国家标准食品微生物学检验 双歧杆菌检验[S]. 北京：中国标准出版社,2016.
[ 5 ] B o o y s e n C,D i c k s L M T,M e i j e r i n g I .Isolation identification and changes in thecomposition of lactic acid bacteria during themalting of two different barley cultivars [J].International Journal of Food Microbiology,2002（76）：63-73.
[6]Parola P,Maurin M,Alimi Y,et al. Useo f 1 6 S r R N A g e n e s e q u e n c i n g t o i d e n t i f yLactobacillus casei in Septicaemia Secondary toa Paraprosthetic Eenteric Fistula[J].EuropeanJournal Clinical Microbiology and InfectiousDiseases,1998（17）：203-205.
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