HPC法测定保健食品中四种大豆异黄酮的含量,本文是保健食品有关学年毕业论文范文跟大豆异黄酮和保健食品和测定方面论文范文集.
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摘 要：为建立HPLC法测定保健食品中四种大豆异黄酮的含量,采用Phenomenex Syneisi Fusion-RP80 (4 bt,m,4.6×150 mm)色谱柱,柱温30℃,以乙腈一水(pH值为3.0)梯度洗脱.流速1.0 mL/min,检测波长260 nm.结果显示,4种大豆异黄酮的标准曲线线性良好(r> 0.999 9,n等于7),大豆苷、大豆素、染料木苷、染料木素平均回收率分别为101.61%、100.11%、101.95%、101.2%.可见本方法简便、灵敏、有效,可为该类保健食品含量测定及质量控制提供依据.
关键词：HPLC法：保健食品：大豆异黄酮
大豆异黄酮是一类具有营养学价值和治疗意义的非固醇类物质,其具有与雌激素类似的分子结构,同时,也是一种植物多酚,具有较强的抗氧化作用,也是目前国际上公认的安全有效的天然植物雌激素.目前,该类食品的检验标准专属性不强,为有效控制该类食品的质量,建立HPLC法测定保健食品中四种大豆异黄酮的含量,为有效控制产品的质量提供依据.
1仪器与试药
Shimadzu LC20A高效液相色谱仪：四元低压梯度泵,LCsolution数据系统,SPD-20A检测器.四种大豆异黄酮对照品：大豆苷(批号：111738-200501)、染料木苷(批号：111709-200501)、大豆素(批号：100347-200702)、染料木素(批号：111704-200501),均由中国食品药品检定研究院提供.样品：为市场抽验样品.试剂,乙腈(HPLC),甲醇(AR),醋酸(AR),水为娃哈哈纯净水.
2方法与结果
2.1溶液制备
对照品贮备溶液及对照品溶液的制备：精密称取对照品适量,分置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备溶液1（大豆苷）、2（染料木苷）、3（大豆素）、4（染料木素）.精密量取对照品贮备溶液l、2各10 mL,对照品贮备溶液3、4各ImL,同置25 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液1,另精密量取2 mL标准溶液1,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液II.
2.2方法学考察
线性关系考察：精密吸取20、10、5 μL标准溶液l与10、5、2、lμL标准溶液II,分别注入HPLC仪,测定峰面积,以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果表明大豆苷在0.030 672～1.536 66 μg.染料木苷在0.03168～3.168μg.大豆素在0.003 4512～0.345 12 μg.染料木素在0.003 56～0.356 μg的范围内均呈良好的线性关系.
精密度试验：精密吸取标准溶液1 5μL,连续重复进样6次,分别测定大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素峰面积.结果RSD分别为0.64%,0.65%,0.62%,0.62%(n等于6), 表明仪器精密度良好.
加样回收率试验：取6只具塞锥形瓶,各精密量取对照品贮备溶液1（大豆苷）、2（染料木苷）各5mL,对照品贮备溶液3（大豆素）、4（染料木）各ImL,挥尽溶液,精密称取已知含量（每lg含大豆苷18.682 mg,含染料木苷24.988 mg,含大豆素0.308 mg,含染料木素0575 mg)的同一批样品6份,分置上述具塞锥形瓶中,照拟订方法制备供试品溶液并按拟订色谱条件测定,计算回收率.大豆苷、大豆素、染料木苷、染料木素平均回收率分别为101.61%、100.11%. 101.95%. 101.21%.
3讨论
提取溶液的确定：本实验用甲醇、80%甲醇、50%甲醇三种溶液分别按样品处理方法提取同一样品,计算峰面积与取样量的比值,结果表明三种溶液的提取效果差异显著,以甲醇提取效果最佳,50%甲醇提取效果次之,80%甲醇提取效果最差.依据实验结果,选择甲醇为溶解样品的溶液.
超声提取时间的确定：本实验用甲醇按样品处理方法,分别超声处理20、30、40 min,提取同一样品,计算峰面积与取样量的比值,结果表明超声处理30 min与40 min,提取效果无差异,而与超声处理20 min提取效果差异显著.依据实验结果,选择以超声处理30 min为本实验的提取时间.
方法耐受性考察：本实验考察了Shimadzu LC20A高效液相色谱仪与Agilentll00型液相色谱仪分别搭配Synersi Fusion-RP 80(4μm,4.6×150mm)色谱柱与Waters Symmetry@-C18(5 μm,4.6×150 mm)色谱柱,在本实验条件下分别测定同一样品的情况,色谱柱不同样品保留行为有差异,但测定结果一致.
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